凯氏定氮仪哪家好

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，蒸馏和滴定同时进行的 。

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凯氏定氮仪的使用步骤

（一）消化

1、准备6个凯氏烧瓶，标号 。1 、2
、3号烧瓶中分别加入适当浓度的蛋白溶液1.0mL
，样品要加到烧瓶底部，切勿沾在瓶口及瓶颈上
。再依次加入硫酸钾-硫酸铜接触剂0.3g ，浓硫酸2.0mL
，30%过氧化氢1.0mL。4、5 、6号烧瓶作为空白对照，用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质 ，对样品测定进行校正 。4
、5、6号烧瓶中加入蒸馏水1.0mL代替样液
，其余所加试剂与1 、2、3号烧瓶相同。2
、将加好试剂的各烧瓶放置消化架上，接好抽气装置
。先用微火加热煮沸 ，此时烧瓶内物质炭化变黑
，并产生大量泡沫，务必注意防止气泡冲出管口。待泡沫消失停止产生后 ，加大火力
，保持瓶内液体微沸，至溶液澄清后 ，再继续加热使消化液微沸15min 。在消化过程中要随时转动烧瓶，以使内壁粘着物质均能流入底部
，以保证样品完全消化
。消化时放出的气体内含SO2，具有强烈刺激性 ，因此自始自终应打开抽水泵将气体抽入自来水排出。整个消化过程均应在通风橱中进行 。消化完全后
，关闭火焰，使烧瓶冷却至室温
。

（二）蒸馏和吸收

蒸馏和吸收是在微量凯氏定氮仪内进行的。凯氏定氮蒸馏装置种类甚多 ，大体上都由蒸气发生、氨的蒸馏和氨的吸收三部分组成 。　1 、仪器的洗涤　仪器安装前
，各部件需经一般方法洗涤干净，所用橡皮管
、塞须浸在10%NaOH溶液中 ，煮约10min
，水洗、水煮10min，再水洗数次 ，然后安装并固定在一只铁架台上
。仪器使用前
，微量全部管道都须经水蒸气洗涤，以除去管道内可能残留的氨 ，正在使用的仪器，每次测样前
，蒸气洗涤5min即可。较长时间未使用的仪器，重复蒸气洗涤 ，不得少于三次
，并检查仪器是否正常 。仔细检查各个连接处，保证不漏气
。 首先在蒸气发生器中加约2/3体积蒸馏水 ，加入数滴硫酸使其保持酸性
，以避免水中的氨被蒸出而影响结果，并放入少许沸石（或毛细管等） ，以防爆沸。沿小玻杯壁加入蒸馏水约20mL让水经插管流入反应室
，但玻杯内的水不要放光，塞上棒状玻塞 ，保持水封
，防止漏气 。蒸气发生后，立即关闭废液排放管上的开关 ，使蒸气只能进入反应室，导致反应室内的水迅速沸腾
，蒸出蒸气由反应室上端口通过定氮球进入冷凝管冷却，在冷凝管下端放置一个锥形瓶接收冷凝水。从定氮球发烫开始计时 ，连续蒸煮5min
，然后移开煤气灯
。冲洗完毕，夹紧蒸气发生器与收集器之间的连接橡胶管 ，由于气体冷却压力降低
，反应室内废液自动抽到反应室外壳中，打开废液排出口夹子放出废液。如此清洗2～3次 ，再在冷凝管下换放一个盛有硼酸-指示剂混合液的锥形瓶使冷凝管下口完全浸没在溶液中
，蒸馏1～2min，观察锥形瓶内的溶液是否变色 。如不变色 ，表示蒸馏装置内部已洗干净
。移去锥形瓶
，再蒸馏1～2min，用蒸馏水冲洗冷凝器下口 ，关闭煤气灯，仪器即可供测样品使用。　2 、无机氮标准样品的蒸馏吸收　由于定氮操作繁琐
，为了熟悉蒸馏和滴定的操作技术，初学者宜先用无机氮标准样品进行反复练习 ，再进行有机氮未知样品的测定 。常用巳知浓度的标准硫酸铵测试三次
。 取洁净的100mL锥形瓶五只
，依次加入2%硼酸溶液20mL，次甲基蓝-甲基红混合指示剂（呈紫红色）3～4滴 ，盖好瓶口待用。取其中一只锥形瓶承接在冷凝管下端
，并使冷凝管的出口浸没在溶液中 。注意：在此操作之前必须先打开收集器活塞，以免锥形瓶内液体倒吸
。准确吸取2mL硫酸铵标准液加到玻杯中 ，小心提起棒状玻塞使硫酸铵溶液慢慢流入蒸馏瓶中
，用少量蒸馏水冲洗小玻杯3次，一并放人蒸馏瓶中。然后用量筒向小玻杯中加入10 mL 30%NaOH溶液 ，使碱液慢慢流入蒸馏瓶中
，在碱液尚未完全流入时，将棒状玻塞盖紧 。向小玻杯中加约5mL蒸馏水 ，再慢慢打开玻塞，使一半水流入蒸馏瓶
，一半留在小玻杯中作水封
。关闭收集器活塞，加热蒸气发生器 ，进行蒸馏。锥形瓶中的硼酸-指示剂混合液由于吸收了氨
，由紫红色变成绿色 。自变色时起，再蒸馏3～5min ，移动锥形瓶使瓶内液面离开冷凝管下口约lcm
，并用少量蒸馏水冲洗冷凝管下口，再继续蒸馏1min ，移开锥形瓶
，盖好，准备滴定。 在一次蒸馏完毕后 ，移去煤气灯
，夹紧蒸气发生器与收集器间的橡胶管，排除反应完毕的废液 ，用水冲洗小玻杯几次，并将废液排除
。如此反复冲洗干净后
，即可进行下一个样品的蒸馏。按以上方法用标准硫酸铵再做两次 。另取2mL蒸馏水代替标准硫酸铵进行空白测定二次
。将各次蒸馏的锥形瓶一起滴定。　3
、未知样品及空白的蒸馏吸收　将消化好的蛋白样品三支，空白对照液三支 ，依次作蒸馏吸收 。 加5mL热的蒸馏水至消化好的样品或空白对照液中
，通过小玻杯加到反应室中，再用热蒸馏水洗涤小玻杯3次 ，每次用水量约3mL
，洗涤液一并倒入反应室内
。其余操作按标准硫酸铵的蒸馏进行。 由于消化液内硫酸钾浓度高而呈粘稠状，不易从凯氏烧瓶内倒出 ，必须加入热蒸馏水5 mL稀释之
，如果有结晶析出，必须微热溶解 ，趁热加入玻杯
，使其流入反应室 。此外，还应当注意趁仪器洗涤尚未完全冷却时立即加入样品或空白对照液 ，否则消化液通过冷却的管道容易析出结晶，造成堵塞
。

（三）滴定

样品和空白蒸馏完毕后
，一起进行滴定。打开接受瓶盖，用酸式微量滴定管以0.0100mol/L的标准盐酸溶液进行滴定 。待滴至瓶内溶液呈暗灰色时 ，用蒸馏水将锥形瓶内壁四周淋洗一次
。若振摇后复现绿色
，应再小心滴入标准盐酸溶液半滴，振摇观察瓶内溶液颜色变化 ，暗灰色在一二分钟内不变
，当视为到达滴定终点。若呈粉红色，表明已超越滴定终点 ，可在已滴定耗用的标准盐酸溶液用量中减去0.02mL
，每组样品的定氮终点颜色必须完全一致 。空白对照液接受瓶内的溶液颜色不变或略有变化尚未出现绿色，可以不滴定。记录每次滴定耗用标准盐酸溶液毫升数 ，供计算用
。

蒸馏和吸收是在微量凯氏定氮仪内进行的。凯氏定氮蒸馏装置种类甚多
，大体上都由蒸气发生、氨的蒸馏和氨的吸收三部分组成 。

1 、仪器的洗涤

仪器安装前，各部件需经一般方法洗涤干净 ，所用橡皮管
、塞须浸在10%NaOH溶液中，煮约10min
，水洗、水煮10min，再水洗数次 ，然后安装并固定在一只铁架台上
。仪器使用前
，微量全部管道都须经水蒸气洗涤，以除去管道内可能残留的氨 ，正在使用的仪器
，每次测样前，蒸气洗涤5min即可。较长时间未使用的仪器 ，重复蒸气洗涤
，不得少于三次，并检查仪器是否正常 。仔细检查各个连接处 ，保证不漏气
。 首先在蒸气发生器中加约2/3体积蒸馏水
，加入数滴硫酸使其保持酸性，以避免水中的氨被蒸出而影响结果 ，并放入少许沸石（或毛细管等），以防爆沸。沿小玻杯壁加入蒸馏水约20mL让水经插管流入反应室
，但玻杯内的水不要放光，塞上棒状玻塞 ，保持水封
，防止漏气 。蒸气发生后，立即关闭废液排放管上的开关 ，使蒸气只能进入反应室
，导致反应室内的水迅速沸腾，蒸出蒸气由反应室上端口通过定氮球进入冷凝管冷却 ，在冷凝管下端放置一个锥形瓶接收冷凝水
。从定氮球发烫开始计时
，连续蒸煮5min，然后移开煤气灯。冲洗完毕 ，夹紧蒸气发生器与收集器之间的连接橡胶管
，由于气体冷却压力降低，反应室内废液自动抽到反应室外壳中 ，打开废液排出口夹子放出废液 。如此清洗2～3次，再在冷凝管下换放一个盛有硼酸-指示剂混合液的锥形瓶使冷凝管下口完全浸没在溶液中
，蒸馏1～2min，观察锥形瓶内的溶液是否变色
。如不变色 ，表示蒸馏装置内部已洗干净。移去锥形瓶
，再蒸馏1～2min，用蒸馏水冲洗冷凝器下口 ，关闭煤气灯
，仪器即可供测样品使用 。

2 、无机氮标准样品的蒸馏吸收

由于定氮操作繁琐，为了熟悉蒸馏和滴定的操作技术 ，初学者宜先用无机氮标准样品进行反复练习
，再进行有机氮未知样品的测定。常用巳知浓度的标准硫酸铵测试三次
。 取洁净的100mL锥形瓶五只，依次加入2%硼酸溶液20mL ，次甲基蓝-甲基红混合指示剂（呈紫红色）3～4滴
，盖好瓶口待用。取其中一只锥形瓶承接在冷凝管下端，并使冷凝管的出口浸没在溶液中 。注意：在此操作之前必须先打开收集器活塞 ，以免锥形瓶内液体倒吸
。准确吸取2mL硫酸铵标准液加到玻杯中，小心提起棒状玻塞使硫酸铵溶液慢慢流入蒸馏瓶中
，用少量蒸馏水冲洗小玻杯3次，一并放人蒸馏瓶中。然后用量筒向小玻杯中加入10 mL 30%NaOH溶液 ，使碱液慢慢流入蒸馏瓶中
，在碱液尚未完全流入时，将棒状玻塞盖紧 。向小玻杯中加约5mL蒸馏水 ，再慢慢打开玻塞
，使一半水流入蒸馏瓶，一半留在小玻杯中作水封
。关闭收集器活塞 ，加热蒸气发生器
，进行蒸馏。锥形瓶中的硼酸-指示剂混合液由于吸收了氨，由紫红色变成绿色 。自变色时起 ，再蒸馏3～5min
，移动锥形瓶使瓶内液面离开冷凝管下口约lcm，并用少量蒸馏水冲洗冷凝管下口 ，再继续蒸馏1min，移开锥形瓶
，盖好，准备滴定
。 在一次蒸馏完毕后 ，移去煤气灯
，夹紧蒸气发生器与收集器间的橡胶管，排除反应完毕的废液 ，用水冲洗小玻杯几次
，并将废液排除。如此反复冲洗干净后，即可进行下一个样品的蒸馏 。按以上方法用标准硫酸铵再做两次
。另取2mL蒸馏水代替标准硫酸铵进行空白测定二次。将各次蒸馏的锥形瓶一起滴定 。

3
、未知样品及空白的蒸馏吸收

将消化好的蛋白样品三支 ，空白对照液三支
，依次作蒸馏吸收。 加5mL热的蒸馏水至消化好的样品或空白对照液中，通过小玻杯加到反应室中 ，再用热蒸馏水洗涤小玻杯3次
，每次用水量约3mL，洗涤液一并倒入反应室内
。其余操作按标准硫酸铵的蒸馏进行。 由于消化液内硫酸钾浓度高而呈粘稠状 ，不易从凯氏烧瓶内倒出，必须加入热蒸馏水5 mL稀释之
，如果有结晶析出，必须微热溶解 ，趁热加入玻杯
，使其流入反应室 。此外，还应当注意趁仪器洗涤尚未完全冷却时立即加入样品或空白对照液 ，否则消化液通过冷却的管道容易析出结晶
，造成堵塞
。 样品和空白蒸馏完毕后，一起进行滴定。打开接受瓶盖 ，用酸式微量滴定管以0.0100mol/L的标准盐酸溶液进行滴定 。待滴至瓶内溶液呈暗灰色时
，用蒸馏水将锥形瓶内壁四周淋洗一次
。若振摇后复现绿色，应再小心滴入标准盐酸溶液半滴 ，振摇观察瓶内溶液颜色变化
，暗灰色在一二分钟内不变，当视为到达滴定终点。若呈粉红色 ，表明已超越滴定终点，可在已滴定耗用的标准盐酸溶液用量中减去0.02mL
，每组样品的定氮终点颜色必须完全一致 。空白对照液接受瓶内的溶液颜色不变或略有变化尚未出现绿色，可以不滴定
。记录每次滴定耗用标准盐酸溶液毫升数 ，供计算用。

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